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细胞支原体检测

    支原体是细胞外生存的最小微生物,是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细菌,也不同于病毒。

    细胞培养中的支原体污染常为人所忽视,原因在于它不易被发现。支原体污染凭肉眼和光学显微镜观察,没有明显的特征,但是支原体影响到培养细胞的几乎每一个方面。细胞不再像以往它们所应该表现的那样。例如,支原体会和宿主细胞竞争营养,改变细胞DNARNA和蛋白质合成状态,降低培养液中氨基酸和ATP水平,诱导细胞染色体改变,改变细胞膜抗原结构等。其结果是细胞增殖受到抑制,细胞死亡增加,DNA发生片段化,产生类似凋亡的形态特征目前实验中经常避免或者确定细胞或者培养基是否存在支原体,需要对其进行检测。

    通过对支原体特定的序列设计引物,当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增,会将目标DNA特异性的复制,然后通过琼脂糖电泳检测,会跑出条带出现阳性结果,反之当没有支原体污染时,由于没有模板,PCR无法扩增,则琼脂糖凝胶电泳跑不出来条带,出现阴性结果,为确保PCR法的准确性,故需要找到最优的PCR条件再进行检测。

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